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技术平台

七大技术平台简介

免疫组织化学技术(Immunohistochemistry, IHC

简称免疫组化。是免疫学与组织化学两种技术的结合,它的基因原理是应用抗原与抗体的特异性结合,再用显色剂显色达到标记细胞的某种抗原物质的定性与定位检测技术,是一种方法简单,且有效的肿瘤标记技术。但它仍有其局限性——应用于蛋白水平,敏感性于特异性不足,故应与其他组织化学、电镜及分子生物学技术相结合。IHC可以检查病变的组织、细胞中是否存在特定的大分子,从而辅助医生进行针对性治疗。

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荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH

该技术是一种以核酸探针杂交为原理,利用探针上的荧光试剂显示细胞质中、细胞核中或染色体上的DNA存在与含量的方法,在临床上,可对染色体上的基因进行定位,检测基因的缺失等突变,还可以检测染色体数目和结构的异常等。该技术具有快速,安全,灵敏度高以及探针可长期保存等特点。

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实时荧光定量PCRReal-time Quantitative PCR, Q-PCR

实时荧光定量核酸扩增检测,简称Q-PCRQ-PCR 已被众多科学家采用,因为其侦测范围广、灵敏度高、准确、专一及快速。qPCR 的发展因为侦测感染病患的病毒或细菌量、癌症监测、诊断个别基因差异的用药反应等应用而大幅提高。 qPCR 的方法是基于侦测目标物在反应前及 PCR 后产物的量化关系。相对于终端 PCR 方式(End-Point PCR,传统的 PCR 配合凝胶电泳,在反应后侦测)qPCR 有许多优点。其结果可以较快取得且稳定,因为是采用非常敏感的化学萤光,而且不需要在 PCR 反应后的侦测步骤。此外,因为反应后不需打开管子而减少了操作污染。该检测方法与IHCFISH相比,特异性强,灵敏度高,定量更准确,适合多基因、少位点的检测。

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扩增阻碍突变系统PCRAmplification Refractory Mutation System PCR, ARMS-PCR)技术
又称等位基因特异性扩增法(ASA)。这种PCR技术根据已知的点突变位点设计引物,使得筛选和检测的准确性和灵敏度很高(0.1-1%)。

微滴式数字PCRDroplet Digital PCR, ddPCR
是一种对核酸分子进行绝对定量的方法。其灵敏度非常高,且只需要很少的模板量;尤其适用于痕量、不易得到的待检样品;弥补了第二代 PCR 系统难以精确测定基因拷贝数、无法对痕量突变定性和定量、精确度低等缺点。非常适合一些稀有样本中核酸的精确检测,适用于肿瘤的早期筛查、肿瘤继发性耐药检测及肿瘤突变负荷(TMB)实时监控等。


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Sanger测序
即第一代DNA测序技术。1977年诞生至今40多年的时间里,Sanger测序仍是国际上的基因测序的金标准,准确度可达到99.99%。利用Sanger测序,可检测已知和未知的DNA变异,包括点突变、小的插入或缺失等,从而发现潜在的、新的变异位点。在肿瘤临床治疗中,Sanger测序技术适合少样本、多位点的检测,根据检测结果,可有效帮助医生为患者制定接下来的治疗方案。

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高通量测序技术,即下一代测序技术(“Next-generation” sequencing, NGS
一次性可以对几十万甚至上百万条DNA分子进行序列测定,效率高,准确性好,灵敏度高(可达0.1%),可同时检测多种已知和未知的突变,包括单核苷酸变异、插入或缺失、融合或重排、扩增等遗传变异。在肿瘤临床治疗中,NGS技术一次性测序的通量大,应用范围广,适用于多样本多位点的检测。

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